Text
OPTIMASI METODE EKSTRAKSI DAN ISOLASI PROTEIN AKTIF DALAM UMBI TALAS JEPANG (Colocasia esculenta L. Schott)
Lektin merupakan protein non-enzimatik dengan aktivitas biologis, yang
dimiliki oleh beberapa tanaman salah satunya pada talas jepang yang disintesis
di bagian umbinya. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mendapatkan kondisi
optimal pada isolasi protein lektin dengan variasi metode pembuatan ekstrak
kasar umbi talas jepang dan variasi pH. Tahapan metode yang dilakukan
dimulai dari pembuatan ekstrak kasar umbi talas jepang dengan variasi metode
menggunakan salting in, salting in dan salting out, dan pelarut phosphate
buffer saline (PBS). Selanjutnya ekstrak yang didapat dilakukan analisa
dengan SDS-PAGE dan ditentukan kadar protein total menggunakan metode
Bicinchoninic Acid (BCA). Dilanjutkan dengan proses purifikasi
menggunakan kromatografi penukar ion dengan variasi pH yaitu 8,3;7,2 dan
9,6 terhadap isolat dilakukan evaluasi uji metode BCA, uji hemaglutinasi dan
SDS-PAGE. Tahap terakhir dilakukan uji hemaglutinasi menggunakan 2% sel
darah merah kelinci. Hasil yang didapat dari optimasi metode ekstrak
didapatkan ekstrak terbaik pada metode dengan pelarut PBS pada bagian
supernatan, hal ini dibuktikan dengan hasil analisis SDS-PAGE pada pita ~12,5
kda. Hasil optimasi pH dengan tujuan purifikasi menggunakan kromatografi
penukar ion diperoleh pada pH 9,6 dibuktikan dengan munculnya single-band
~12,5 kda pada SDS-PAGE 12% gel akrilamid serta terjadinya aglutinasi yang
dinyatakan positif pada tahap uji hemaglutinasi. Dari proses penentuan kadar
protein total lektin melalui metode BCA, didapatkan range protein pada
1284,83 – 2947,33 μg/mL. Simpulannya bahwa pada tanaman talas jepang
bagian umbinya terkandung senyawa protein aktif berupa lektin, dan
ditemukan hasil yang optimal dari variasi metode ekstraksi serta variasi pH
pada proses purifikasi.
Tidak tersedia versi lain