Text
EFEK KONSENTRASI INDUKSI ISOPROPYL–β-DTHIOGALACTOPYRANOSIDE (IPTG) PADA GEN Leptospira pomona DALAM VEKTOR Escherichia coli BL21 TERHADAP EKSPRESI PROTEIN LipL32
ABSTRAK
(A) YENI YUNINGSIH
(B) EFEK KONSENTRASI INDUKSI ISOPROPYL–β-DTHIOGALACTOPYRANOSIDE
(IPTG) PADA GEN Leptospira pomona
DALAM VEKTOR Escherichia coli BL21 TERHADAP EKSPRESI
PROTEIN LipL32
(C) xiii + 49 halaman; 1 tabel; 15 gambar; 9 lampiran
(D) Kata Kunci : Induksi IPTG, Leptospira Pomona, Escherichia coli BL21,
Protein LipL32
(E) Protein LipL32 merupakan salah satu protein outer membrane dan sifatnya
conserved dari Leptospira interrogans. Produksi LipL32 dipengaruhi oleh
penginduksian isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) agar protein
LipL32 terekspresi. Dalam produksi protein LipL32 digunakan Escherichia
coli BL21 sebagai inang dan plasmid yang telah disisipi gen Leptospira
pomona untuk memproduksi protein LipL32. Konsentrasi induksi IPTG
berpengaruh terhadap ekspresi protein LipL32 dikarenakan induksi IPTG
dengan konsentrasi yang tidak tepat dapat bersifat toksik yang menyebabkan
Escherichia coli BL21 akan lisis. Lisisnya Escherichia coli BL21
menyebabkan protein LipL32 tidak terekspresi. Tujuan penelitian ini untuk
mengetahui pada konsentrasi berapa induksi IPTG dapat mengekspresikan
protein LipL32 yang tertinggi dan melihat potensi protein LipL32 sebagai
antigen untuk diagnosis cepat leptospirosis. Dalam pengujian, induksi IPTG
dibuat dengan tiga konsentrasi, yaitu 0.5 mM, 0.75 mM, dan 1 mM,
dilakukan dengan waktu induksi 4 jam. Pellet dikumpulkan dari hasil
sentrifugasi kultur kemudian dilakukan pemisahan protein dengan SDSPAGE.
Hasil pemisahan protein LipL32 dianalisis secara deskriptif dengan
melihat perbedaan intensitas warna band yang dihasilkan dan adanya
perubahan warna menjadi kecoklatan yang berarti positif pada pengujian
protein LipL32 sebagai antigen dengan metode western blotting. Hasil
penelitian menunjukkan pada induksi IPTG konsentrasi 0.5 mM
menghasilkan protein LipL32 dengan intensitas warna yang paling tebal.
Hasil western blotting menunjukkan bahwa protein LipL32 mampu bereaksi
dengan antiserum Leptospira interrogans, sehingga protein LipL32 dapat
digunakan sebagai antigen untuk mendiagnosis cepat leptospirosis.
(F) Daftar Rujukan: 53 buah
(G) Prof. (ris). drh. Darmono, M.Sc. ; drh. Sumarningsih, P.hD.
Tidak tersedia versi lain